1.可否使用与原先培养条件不同之培养基？

  不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。

2.可否使用与原先培养条件不同之血清种类？

  不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

3.如何选用特殊细胞系培养基？

  培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。

4.何时须更换培养基？

  视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。

5.细胞培养基偶然被冻，可否继续使用？

  如果细胞培养基偶然被冻，您应该熔化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基。

6.无血清培养与有血清培养使用的抗生素量一样吗？

  当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。

7.培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

  一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

8.培养基及其它添加物和试剂可反复冻融吗？

  大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。

9.为什么要在溶解的一周内使用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液？

  胰蛋白酶在4℃就可能开始降解，如果在室温下放置超过30分钟，就会变得不稳定

10.DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？

   冷冻保存使用之DMSO 等级， 必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)， 其本身即为无菌状况， 第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于4°C， 避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质， 并可减少污染之机会。若要过滤DMSO， 则须使用耐DMSO 之Nylon 材质滤膜。

11.冷冻保存细胞之方法？

   方法一：冷冻管置于4℃ 30~60分钟→(-20℃ 30分钟)→-80℃ 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。

   方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

12.支原体污染会对细胞培养有何影响？

   支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数， 代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。

13.侦测出细胞株有支原体污染时，该如何处理？

   直接灭菌后丢弃，以避免污染其它细胞株。

14.为何培养基保存于4℃冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值会越来越偏碱性？

   培养基保存于4℃冰箱中，培养基内之CO2会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果，将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之CO2，以调整pH值。

15.细胞冷冻培养基之成份为何？

   动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5-10% DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能， 故不可将DMSO直接加入细胞液中， 必须使用前先行配制完成。

16.培养细胞时应使用5%或10%CO2？或根本没有影响？

   一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5%CO2培养细胞。

17.培养基中是否须添加抗生素？

   除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。

18.应如何避免细胞污染？

   细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。