[导读] 酶联免疫学第三方检测中心2015实验技术座谈会于2015年3月29日在公司总部(上海)召开。会中，我公司技术总监欧阳博士根据多年经验讲谈ELISA实验的检测要点。据欧阳博士介绍，应用ELISA时，首先要清楚这几个内容：① 检测抗体还是抗原；② 检测的结果是定性还是定量；③ 是否需要检测特异抗体的类型；④ 所用抗体/单克隆抗体的亲和力怎么样。

 

    一、检测抗原

    最常用于检测抗原的方法是非竞争性的双抗体夹心法，其次是竞争法。但竞争法在具体实验中有些困难，特别是检测微生物的抗原，因为需要标记抗原，这对于某些抗原是很难做到的，甚至是不可能的。另外在竞争法中，酶标记的抗原与标本直接混合在一起，许多标本中含有酶抑制剂或蛋白A样物质，可影响ELISA的结果。

    二、检测抗体

    检测抗体种类常用的方法是检测抗体种类的捕获法，这个方法常用于检测特异性IgG、IgA、IgM。这个方法的第一步是捕获所需要检测的一个种类的抗体，接下来是检测捕获的抗体是否是特异性抗原的抗体。间接ELISA在检测IgG时比较简单，但不适用于检测其他种类的抗体，因为血清中如果有特异IgG存在将与IGM或IgA等竞争结合抗原。

    竞争法检测抗体有两种方法：一种是将标记的抗体和标本同时加入反应孔内，但标记的抗体和标本中的抗体必须是结合抗原的不同决定簇；另一种是先加标本，冲洗后再加标记的抗体。竞争法检测抗体比间接法容易判断结果，并且比较敏感和特异。不论选择哪种方法，都包括6个步骤：①抗原或抗体吸附于固相；②加标本和试剂；③孵育和冲洗；④加酶标抗原或抗体；⑤加适当的底物；⑥检测和分析结果。

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