AGES就是糖基化终末产物的英文简写，它是非酶糖基化反应(Maillard反应)的终末产物。是指蛋白质、脂质或核酸等大分子在没有酶参与的条件下，自发的与葡萄糖或其他还原单糖反应所生成的稳定的共价加成物。本试剂盒用于测定斑马鱼血清，血浆及相关液体样本中晚期糖基化终末产物(AGEs)含量。那么在ELISA实验中有哪些注意事项呢，恒远生物小编为大家总结ELISA实验操作注意事项。

 

一、实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中斑马鱼晚期糖基化终末产物(AGEs)水平。用纯化的斑马鱼晚期糖基化终末产物(AGEs)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入晚期糖基化终末产物(AGEs)，再与HRP标记的晚期糖基化终末产物(AGEs)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的晚期糖基化终末产物(AGEs)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中斑马鱼晚期糖基化终末产物(AGEs)浓度。 

 

二、标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

 

三、注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

 

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