严格的消毒灭菌对保证细胞培养的成功是极为重要的，其方法分为物理法和化学法两类。前者包括干热、湿热、滤过、紫外线及射线等，后者主要指使用化学消毒剂等。
热灭菌：玻璃器皿，160-170℃ 90-120min 或 180℃ 45-60min。
蒸气灭菌：用于玻璃器皿、滤器橡胶塞、解剖用具、耐热塑料器具、受热不变性的溶液等，不同物品其有效灭菌压力和时间不同，如培养用液、橡胶制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高压灭菌10min；布类、玻璃制品、金属器械等用103kPa(121.3℃)高压灭菌15~20min。
滤过除菌：适于含有不耐热成分的培养基和试剂的除菌，用孔径为0.22μm微孔滤膜可除去细菌和霉菌等，用此滤膜过滤两次，可使支原体达到某种程度的去除，但不能除去病毒。
紫外线：紫外线的波长为200-300nm，最强是在254 nm，6-15平方米最少一只紫外灯，高度要在2.5m以下，湿度45%~60%，杆菌效果好，球菌次之，霉菌、酵母菌最差，实验前应不低于30分钟的照射时间。
熏蒸消毒：当遇有细胞培养出现多次污染，或实验室两个月一次的常规消毒，均可用高锰酸钾5-7.5g，加甲醛(40%)10-15ml，混合放入一开放容器内，立即可见白色甲醛烟雾，消毒房间需封闭24小时，致少4小时以上。
煮沸消毒：紧密情况时使用，金属器械和胶蹇在水中煮20-30分钟，趁热倾去水分即可使用。
化学消毒：化学药品消毒灭菌法是应用能杀死微生物的化学制进行消毒灭菌的方法。实验室桌面、用具及洗手用的溶液均常用化学药品进行消毒杀菌。
常用的有：2%煤酚皂溶液(来苏尔)、0.25%新洁尔灭、1%升汞、3-5%甲醛溶液、75%酒精。
仪器、材料及试剂准备
1.仪器：超净工作台，干燥箱，高压锅，过滤器。
2.材料：紫外灯，0.22μm微孔滤膜。
3.试剂：75%酒精，0.1%新洁尔灭，高锰酸钾，重铬酸钾，浓硫酸。
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