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秋季畅谈:ELISA步骤核心的那些事儿

点击次数:1992次     发布时间:2017/8/25 10:50:42

    要保证ELISA实验效果的必备要求有高品质的试剂盒、良好的仪器、正确的操作,这三大点做好之后基本上就没什么问题了。其中,还有一些注意事项和重点要求需要掌握。今天我们就来秋季畅谈:ELISA步骤核心的那些事儿。就拿洗涤来说。这步骤有着决定性的作用,分有浸泡式、流水冲洗式两种,ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的本公司要求使用的纯化水电导率小于1.5μs/cm。

一、保温:
   在建立ELISA方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时,产物的生成可达顶峰。为避免蒸发,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,反应板不宜叠放,以保证各板的温度都能迅速平衡。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。由于公司的试剂盒温育是在空气浴中完成,采用水浴会造成值偏高或花板。另外温育中还有边缘效应,边上的值会偏高,建议为了客观的判断结果,将质控放在非边缘位置。

二、基因工程抗原与合成肽抗原的区别:
   基因工程抗原是抗原基因在质粒载体中原核或真核表达的蛋白质抗原,多以大肠杆菌或酵母菌为表达系统。该类抗原与合成肽相比,分子量大。合成肽采用化学方法制备,由于工艺的局限,合成数量有限,只能达到数百个氨基酸;而利用基因工程制备的抗原,分子量更大。

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