昨天下午,来自华南师范大学的瞿老师致电我司吴经理咨询ELISA实验相关技术。还记得春节前,瞿老师在我公司购买了大鼠白介素5试剂盒,售后反应非常好,这次来电向我公司吴经理主要咨询的是ELISA检测交叉反应问题。
如果抗体间发生冲突或交叉反应就会影响整个实验的特异性,其中抗体来源所带来的兼容性就是交叉反应的一个因素。在吴经理与客户交流ELISA交叉反应的过程中,吴经理说道:“尽管现在购买源自指定动物的抗体越来越容易,我们仍有必要确认一下是否会产生交叉反应的问题。在用双抗夹心法进行ELISA检测时,检测用的二抗必须特异性针对检测一抗,而不能与捕获抗体起反应。如果检测用二抗与捕获抗体结合,实验特异性就会大打折扣。通常我们选用源自不同宿主的捕获抗体和检测一抗,来避免上述问题。”
如今检测ELISA有许多途径,我们可以根据自己的偏好进行选择。一般ELISA检测的是酶促反应的可溶性产物,抗体上结合有相应的酶,而反应体系中添加有相应的底物。这种酶促反应生成具有特征性的颜色,可以通过分光光度计进行检测,碱性磷酸酶AP也是一种常用酶。酶可以结合在一抗上,也可以结合在二抗上,还可以使用链霉亲和素标记的酶与亲和素标记的一抗结合。此外ELISA的结果检测还包括放射性检测、荧光检测、化学发光或显色法检测等。
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