每次面对新学期的开始，是不是让不少ELISA Kit实验的新手同学们有点儿手足无措呢？下面一起来看下上海恒远生物为您分享的实验内容吧，四月学习:最新ELISA Kit技术资料。

一、DIY夹心法ELISA常见技术指南：

    选择抗体时最好选择一个单抗和一个多抗进行配对；若选择两个单抗，必须识别不同表位的抗体；最好从同一家公司选择抗体对。ELISA实验中为了确定最佳信号和最低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时，应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。标准品的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。

    一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。为了优化灵敏度，建议放置一个晚上孵育标准品和标本。若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。当测定混合液体中的抗原时。 

二、ELISA用处：

  1. 将酶催化反应的放大作用和抗原抗体亲和反应的高度专一性、特异性相结合，以酶标记的抗原或抗体作为主要试剂进行免疫测试，所以具有很高的灵敏度。

  2. 实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。

  3. 其抗原抗体反应具有高度的特异性。

  4. 为浓缩液，配有稀释液，稀释后直接可用，无需另行配置。

三、灰区的设置：

    通常情况下，ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果，两者间有一条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off value，CO值)，这是定性免疫测定结果报告的依据。

四、标本复查：

    ELISA手工检测过程复杂，影响因素较多，即使室内质控在控，也可能因孔间差异而造成结果的差异，因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠方法，比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱阳性标本及少见模式的检测结果进行复查。

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