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Elisa试剂盒使用指南赏析

点击次数:853次     发布时间:2016/3/24 11:10:24

ELISA检测试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
试剂盒使用指南

步骤

常见问题

解决方案

实验准备

加样器不准确;尤其10ul以下的加样器,对结果影响极大;
保温设备不良;
洗涤用水不规范。

校正加样器;10ul以下加样器最好采用进口产品(芬兰、法国等);
仔细校正温度到37,水浴箱为佳;
必须使用去离子水或蒸馏水,不得用自来水、矿泉水等。
认真阅读使用说明书。

样品加样

加样不准确;
没有混匀。

加样时一定要仔细。加样后,再检查,以防漏加、错加。
加样后,反复抽吸3次混匀,防止血清聚集孔底,导致非特异性吸附。

洗涤

洗涤不彻底

每次注水洗涤,应静止30秒钟;
选用吸水纸作为衬垫,每次洗涤后扣干孔内水分;
可选用塑料洗涤瓶。

加酶反应

漏加

滴加后,认真检查各孔

试剂保存

保存不规范

一定要在2-8存放。不得过高,也不得冻存(冻存后,酶液将失效)。

对照品

对照品为冻干品

按对照管标示,加入相应体积的去离子水或蒸馏水复溶,充分溶解混匀。可按说明书使用。


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