ELISA检测试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
试剂盒使用指南
步骤 | 常见问题 | 解决方案 |
实验准备 | 1 加样器不准确;尤其10ul以下的加样器,对结果影响极大; | 1 校正加样器;10ul以下加样器最好采用进口产品(芬兰、法国等); |
样品加样 | 1 加样不准确; | 1 加样时一定要仔细。加样后,再检查,以防漏加、错加。 |
洗涤 | 洗涤不彻底 | 1 每次注水洗涤,应静止30秒钟; |
加酶反应 | 漏加 | 滴加后,认真检查各孔 |
试剂保存 | 保存不规范 | 一定要在2-8℃存放。不得过高,也不得冻存(冻存后,酶液将失效)。 |
对照品 | 对照品为冻干品 | 按对照管标示,加入相应体积的去离子水或蒸馏水复溶,充分溶解混匀。可按说明书使用。 |
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