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上海恒远讲解酶联免疫吸附实验

点击次数:953次     发布时间:2016/1/22 8:53:44

如今ELISA方法已被广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。在动物检疫方面,ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的标准方法。
   1定义:用酶标记抗原或抗体检测液体(血液、细胞液)中未知抗体或抗原的方法。
原理:
1、利用抗原与抗体的特异性反应将待测物与酶链接
2、通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定
测定的对象可以是抗体也可以是抗原。
常用种类:
直接法(direct ELISA):将已知抗原直接吸附于载体,加酶标抗体。检测抗体
间接法(indirect ELISA):将已知抗原吸附于固相载体,加酶标记二抗。检测液相中未知抗体
双抗体夹心法(Sandwich ELISA):将已知抗体吸附于固相载体,酶标记一抗。检测液相的可溶性抗原
竞争法(Competitive ELISA):将已知抗体或抗原吸附于固体相载体,酶标记抗原或抗体。检测液相中的可溶性抗原或抗体
阻断法(Block ELISA)
将已知抗原吸附于固相载体,酶标记单克隆抗体。检测液相中的可溶性抗体,
1、直接法测定抗原
A:将抗原吸附在载体表面
B:加酶标抗体,形成抗原—抗体复合物
C:加底物。底物的降解量=抗原量。
2、间接法测定抗体
A:将抗原吸附于固相载体表面
B:加抗体,形成抗原-抗体复合物
C:加酶标抗体
D:加底物。测定底物的降解量=抗体量
3、双抗体夹心法测定抗原
A:将抗体吸附于固相表面
B:加待检抗原,形成抗原—抗体复合物
C:加酶标抗体
D:加底物。底物的降解量=抗原量
4、竞争法测定抗原
A:将抗体吸附在固相载体表面
B:同时加入酶标抗原待测抗原,竞争结合抗体;对照只加入酶标抗原
C:加底物。对照品与样品孔底物降解量的差=未知抗原量
5、阻断法测定抗体
本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎(TGE)、猪伪狂犬病(PR)及猪胸膜肺炎(AP)的主要检测法。
A:将抗原吸附于在固相载体表面;
B:先加待检血清(抗体),形成抗原-抗体复合物;
C:再加酶标单抗
D:加底物

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