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ELISA操作常见问题“加样”的解决办法

点击次数:1141次     发布时间:2016/1/7 9:42:38

ELISA

操作常见问题解决办法

 

ELISA

方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但

ELISA

测定中影响因素较多,而且

其操作中有一定的技术要求,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果。引

ELISA

测定错误结果的原因主要有:

标本因素;

试剂因素;

操作因素。下面就一些

常见

ELISA

操作过程中的问题一一分析。

 


                                                         ELISA操作常见问题“加样”的解决办法 
ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②试剂因素;③操作因素。下面就Elisa试剂盒中“加样”操作过程中的问题为您具体分析。 

步骤

可能原因

解决办法

选  材

选择质量优良的检测试剂(可以看下ELISA试剂盒选购经验总结篇),操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。

   

 

 

   

 

1.血清或血浆标本分离不好即进行加样;

2.手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)

3.加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。

 

1.标本为血清:最好将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。

2.加样后及时放入孵箱。

3.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

4.如果采用AT或其他全自动加样,最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。

 

5.标本较多时,请分批操作。

在现在的ELISA试剂盒(www.elisakit168.com)中,必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是:加样不可太快,要避免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡。加样太快,无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以,有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性,下次测定为阴性,往往就是上述加样及试剂的错误所致。 

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