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室温对人丙肝ELISA试验的影响

点击次数:683次     发布时间:2015/8/14 11:00:02

 丙型肝炎病毒(HCV)能够导致输血后肝炎。目前尚无特效药物治疗,主要依靠献血员的筛选来预防感染。献血员HCV的诊断主要以抗-CV ELISA、试验方法较为普便。ELISA敏感性高,特异性强,但实验中条件不当亦可造成假阴性和假阳性结果。为了解实验室温度对抗-HCV ELISA检测结果的影响,我们进行了一些研究。

  血清为卫生部检测中心2NC/ml定值质控血清,批号969,不同温度条件下连续测定20次。仪器为美国MR-4100酶标仪和STATFAX-2600洗板机。抗-HCV ELISA试剂盒由厦门新创公司提供,批号970510,操作按说明书。结果,抗-HCV ELISA试验在不同实验室温度6℃,16℃,25℃,30℃,37℃下进行,由低至高组观察了在室温显色10分钟及在37℃显色10分钟,发现其S/co值与A值均升高,显正相关。加显色剂后37℃孵育与室温避光放置,两组结果经t检验,P<0.001,有显著性差异。尤其应该注意的是6℃组质控血清在室温显色10分钟后结果全部为阴性,16℃组部分呈阴性结果。据此,可以看出温度影响了抗-HCV ELISA试验的观察结果。

  ELISA其方法原理为抗原与抗体特异性结合和抗原抗体的酶标记,以酶催化底物显色来判断结果。而抗原与抗体的结合吸酶催化底物的效率均与温度有关。温度高,显色深,S/co值高,室内温度低,显色浅,S/co值低,影响结果观察。我们对新创公司试剂盒操作方法做了一点改变。将室温避光显色8~12分钟改为37℃水浴箱避光显色8~12分钟,其A值及S/co有较大程度的升高。如按其操作说明,6℃组质控血清出现全部假阴性结果,16℃组部分出现假阴性结果。由于免疫质控CV值较一般生化常规大,如果实验室温度较低时,弱阳性很可能做出假阴性结果。中国幅源辽阔,国内各地温差极大,如欲保证实验室间质控结果准确,检验结果应有连续性和可比性,建议有关实验应配备温度调节设备,以25℃为宜。实验室温度过低或过高,对实验室仪器及工作环境均有很大影响。

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