ELISA检测的目的是为实验提供准确可靠的定量分析实验依据。为了保证实验数据的可靠性，在实验过程中必须坚持全面质量控制和全过程质量控制。在收集标本前都必须有一个完整的计划。
注意事项：
◆ 每个标本量收集体积＝10ul×检测种类，如要做复孔，标本量收集体积＝10ul×检测 种类×2。
◆ 对于作某一个具体指标来说，最好先用一系列稀释度作一批标本测定，得出对实验有意义 的一个稀释度（即测定剂量反应曲线），然后用一个最适稀释度测定即可。
◆ 收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在
4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条 件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70度 可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。
◆ 血清标本采集时，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质， 以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。
◆ 为了保证尿液检测结果的准确性，必须正确收集尿液标本和保存。盛尿容器要清洁干燥。 最好使用一次性的容器（如塑料尿杯），避免因用药并清洗不干净而造成的污染，影响检
测结果。尿液标本必须新鲜，留取后，应及时检测或保存，以免细菌繁殖。因在室温中久 置后（尤其是夏季）尿中磷酸盐等可析出结晶而干扰检测。
◆ 标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。 保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。
◆ 冻结标本融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠 倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。
◆ 混浊或有沉淀的标本应先离心或过滤，澄清后再检测。
◆ 反复冻融会使蛋白效价降低，所以待测标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。也可 加入适当防腐剂。
◆ 如果您在实验中遇到任何特殊问题，请咨询我们。
通常我们可用于ELISA检测的样本是有多种类型的，如血清、血浆、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等，不同类型的检测样本前期的处理方法是不一样的。正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的第一步，下面简单介绍一下不同类型的样本的处理方法。
1.血清
血清是最常用于ELISA检测的一类样本，处理也比较简单。
用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本，将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜，使血清析出。（最好将试管或离心管倾斜放置，使液面横截面增大，能使血清更大程度的析出。）4℃ 1000×g离心20分钟，仔细收集上清。建议将血清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
采血过程中应避免溶血，因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质，在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色，而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染，因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
2.血浆
用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本，标本采集后30min内4℃ 1000×g离心15min，取上清即血浆。将上清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
常用的抗凝剂为EDTA、肝素钠和枸橼酸钠等，检测时还应仔细阅读试剂盒说明书，检查试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。
3.细胞培养上清
取细胞培养上清到离心管，1000×g离心20min，除去细胞碎片及杂质，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
4.细胞裂解液
①吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
②收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。
③加入适量的预冷PBS或细胞裂解液（临用前加入蛋白酶抑制剂）重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
④将样品放入-20℃或-80℃，使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融几次，使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎，以达到裂解的目的。
⑤4℃10000×g 离心10min，除去细胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
5.组织匀浆液
①将组织样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲洗，洗去组织表面残留的血液或杂质。
②将组织块称重，记录后剪碎，碎块应尽量小，便于匀浆得更充分
③将组织按一定的比例加入预冷的PBS（临用前加入蛋白酶抑制剂）匀浆，匀浆时置于冰上或冰浴中。（通常按组织重量：PBS体积=1:9的比例匀浆，例如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数）
④吸取匀浆液到离心管，4℃ 5000×g 离心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
6.尿液、唾液等其他液体生物样本
1000×g离心20min，取上清即可检测。
总的来说，因为ELISA只能检测可溶性蛋白的含量，所以应保证所有样本均为澄清的液体，沉淀或悬浮物都应离心去除。
为了保证检测的准确性，保存于-20℃或-80℃的样本最好在1~6个月内检测；4℃保存的样本应在1周内进行检测。
另外，还应保证样本不含NaN3，因为NaN3会抑制HRP的活性，从而导致假阴性的结果。
