免疫组化染色的关键环节除了优质的抗体、敏感的检测方法和熟练的组织制备技术，还需要具有很好的抗原的消化和修复技术，目前检测石蜡切片的90%的抗体都是需要采用抗原消化或者抗原修复方法，才能够获得满意的结果的。因为组织在制备过程中，由于化学试剂的作用封闭了抗原，热作用致使部分抗原的肽链发生扭曲，所以在石蜡、冰冻和塑料切片免疫组织化学（IHC）实验过程中，可以采用胰蛋白酶消化、表面活性剂破膜、微波缓冲液和金属盐修复等方法，使被掩盖的抗原决定簇或变性的抗原重新暴露或抗原性得到一定程度的恢复，使原来认为不能在石蜡切片上进行IHC的许多抗体获得良好的染色结果。

　　目前，抗原修复有许多种方法，有的是根据抗体的要求进行，有的是根据抗原的表达程度来进行，有的对每种病例每项检测，都要求必须进行抗原修复，以达到抗原全面表达的最佳状态。本手册主要推荐采用常用的酶消化和微波热修复的方法。

　　作为免疫组化实验中最关键的一步，抗原修复的方法、温度、修复时间、修复介质都影响到实验的结果。上海恒远生物提供多种抗原修复试剂，供实验者根据不同的抗原选择不同的修复介质修复以达到最佳的修复效果。
用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片

1 抗原热修复

A 高温高压热修复 取一定量的 0.01M 柠檬酸盐缓冲液 pH6.0 于压力锅中 大火加热至沸腾 将脱蜡水化后的组织芯片置于耐高温塑料切片架上 放入已沸腾的缓冲液中 盖上锅盖 扣上压 力阀 继续加热至喷气 从喷气开始计时 1-2 分钟后 压力锅离 开热源 冷却至室温 取出玻片 先用蒸馏水洗两次后用 PBS 洗5 分钟

B 微波热修复 取一定量的 0.01M 柠檬酸盐缓冲液 pH6.0 于微波盒中 微波加热至沸腾 将脱蜡水化后的组织芯片置于耐高温塑 料切片架上 放入已沸腾的缓冲液中 中高档继续处理 10-15 分 钟 取出微波盒冷却至室温 取出玻片 先用蒸馏水洗两次后用PBS 洗 5 分钟

C 酶消化方法 常用 0.1%胰蛋白酶和 0.4%胃蛋白酶液 胰蛋白酶使用前预热至 37 切片也预热至 37 消化时间约为 5~30分钟 胃蛋白酶消化 37 时间为 10-30 分钟