购买ELISA试剂盒时,很多客户们会比较关心“质量过关吗”“寿命长久吗”“精密度够要求吗”等相关问题。ELISA实验中为了确定最佳信号和最低背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定,包括在适当范围内的标准品的系列稀释,按试剂说明书常规提供的范围进行操作。这些都是一些基础知识,今天酶联免疫学第三方检测中心带您一起来看最新ELISA试剂盒操作技术常识分享:
试剂盒的配制:对于每种细胞因子应仔细阅读说明书,注意每批的细节。在使用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节,将冻干的细胞因子复溶。
一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。为了优化灵敏度,建议孵育标准品和标本。若使用过氧化物酶作为显色系统,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物ELISA试剂盒酶的活性。
注意事项
1.浓缩洗涤液出现结晶后,请于37℃孵育15分钟
2.使用前应将盒内各试剂取出,室温放置至少30分钟。
3.保存于2-8℃,请勿冷冻,有效期请见盒内标示。
什么是ELISA试剂盒的回收率?是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出标准数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20 mg/L,取100mL被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L,则认为回收率为98%。
对于定量检测来说,主要还是一个准确度的验证。不过我看到别人写的内容比我自己想说的要好,所以就贴上去了。相对回收率可能会高于100%的,如果只是说“损失程度”,其实是不准确的。应该说,回收率越接近100%,说明这个试剂盒的准确度越高。