不知不觉新年的第一个月已经过半到中旬，今天上午，我公司党经理接到实验技术部发来的2015最新ELISA方法测定拓展解说。
我公司具有完善的实验技术开发平台，成熟的抗原、抗体研发系统，熟练掌握各种酶联技术，结合公司的研发团队，可以有效的保证公司产品的稳定性和准确性。在最新ELISA方法测定拓展中，主要介绍了酶联免疫吸附试验(ELISA)测定伤寒杆菌“O”抗体：
酶联免疫吸附试验是用酶标记的抗体（或SPA）检测未知抗原或抗体的方法。此法敏感性高，特异性强。常用的是ELISA方法，间接法，双抗体法和抗原法。本次试验介绍，酶联葡萄球菌蛋白A免疫分析法。ELISA法原理如下，见图：
图 ELISA－SPA法原理
1. 加抗原 使之吸附于固相载体（如塑料反应板）
2. 洗涤 加待测血清
3. 洗涤 加酶标记SpA
4. 洗涤 加酶的底物。经酶的催化产生有色产物。
材料：
1. 聚乙烯塑料反应板（PH9.6时可吸附蛋白Ag）
2. 抗原：伤寒杆菌O901煮沸或超声波粉碎抗原
3. 待测血清
4. 冻干酶联葡萄球菌A蛋白（HRD—proteinA）纯品
5. 邻苯二胺（OPD）
6. 包被液：0.05M碳酸钠—碳酸氢钠溶液PH9.6
7. 稀释液：10%免疫血清PBS—吐温20，防止非特异性吸附
8. 洗涤液：0.02MTrisTWeen20 ,Ph7.4防止非特异性吸附
9. 底物溶液： 0.02M磷酸氢二钠25.7毫升
0.1M柠檬酸24.3毫升
蒸馏水50毫升
临用前新鲜配制，在上述缓冲液中溶解40毫克邻苯二胺，然后加入30%双氧水0.15毫升，底物对光敏感，需要避光并立即使用。
10. 终止液；2M硫酸。
方法：
1．抗原包被
取洁净的聚苯乙烯微量反应板，于每孔内加伤寒抗原0.1毫升（用包被缓冲液稀释，蛋白含量10微克/毫升），置37℃1小时，弃抗原液，用洗涤液3次每次3分钟。
2．加待测血清
于每孔内分别加不同稀释度（如1：5，1：10，1：20…1：80）的待测血清，PBS空白对照，阴性对照血清，阳性对照血清各0.1毫升。置37℃30分钟，洗涤3次。
3．加酶联A蛋白
于每孔加酶联A蛋白各0.1毫升，置37℃20分钟，洗涤3次。
4．加临时配制的底物溶液各0.1毫升，置暗处15分钟。加2M碳酸1滴终止反应。
5.结果判断：（肉眼判断）
若颜色于阴性对照相同则为阴性，若较阴性对照深则为阳性，根据颜色深浅以（+）表示。
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