我公司主要为您提供实验室科研产品，其中主营产品酶联免疫试剂盒(ELISA KIT)可提供免费代测服务。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体，那么酶联免疫实验代测原理主要有哪些呢？ 我们可以根据以下几个方面来分析：

第一、实验原理

    应用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入，再与HRP标记抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中浓度。

    在ELISA测定方法中，有这几个必要试剂：

    ① 固相的抗菌素原或抗体，即免疫吸附剂。

    ② 酶标记的抗原或抗体，称为结合物。

    ③ 酶反应的底物。

     

第二、定量测定

    ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。

    测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线最高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数纸，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。

    测定小分子量物质常用竞争法，其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准曲线的形状因试剂盒所用模式的差别而略有不同。

     

第三、酶联免疫试剂盒的基本原理

    1.抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水 性部分相互吸附，并保持其免疫学活性； 

    2.抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学 和酶学活性；

    3.酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反 应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。

    酶联免疫实验代测原理中，还包括了其试剂盒产品的作用：

    ① 将酶催化反应的放大作用和抗原抗体亲和反应的高度专一性、特异性相结合，以酶标记的抗原或抗体作为主要试剂进行免疫测试，所以具有很高的灵敏度。

    ② 实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。

    ③ 其抗原抗体反应具有高度的特异性。

    ④ 为浓缩液，配有稀释液，稀释后直接可用，无需另行配置。