小鼠血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1 (LOX-1)ELISA试剂盒

检测范围：15pg/ml-400pg/ml

使用目的：

本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1 (LOX-1)水平。用纯化的小鼠血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1 (LOX-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1 (LOX-1)，再与HRP标记的血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1 (LOX-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1 (LOX-1)正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1 (LOX-1)浓度。

试剂盒组成

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

操作程序：

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。