LB营养琼脂基本概述

英文名称：LB Nutrient Agar 

级别：BR

成分(g/L)

胰蛋白胨：10.0

酵母浸粉：5.0

氯化钠：10.0

琼脂：15.0

PH：7.0±0.2

用法：取本品4.0克,加热溶解于100ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟备用

质量控制和典型特征：接种10-100个大肠杆菌Jm109、Hb101在36±1℃培养18-24小时生长明显

性状：干燥粉末。易吸湿。

用途：生化研究。用于发酵工程、基因工程和分子生物学中大肠杆菌的培养

保存：RT

细菌总数菌显色培养基用途：

   细菌总数菌显色培养基主要是用于快速检测食品、水质和环境中的细菌总数，细菌显红

色。

大肠杆菌显色培养基主要是用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠杆菌的快速检测。大肠杆菌显蓝绿色，大肠菌群显无色，其它菌显黄色或无色，革兰氏阳性菌被抑制。

 培养基和试剂消毒处理方法

培养基通常采用高压湿热灭菌法121 ℃灭菌15分钟，特殊培养基按使用者的特殊要

求进行灭菌（如含糖培养基115 ℃灭菌20分钟）。

部分培养基（如嗜盐琼脂培养基、胆硫乳培养基），只能煮沸灭菌。

对热敏感的培养基或添加物质，应采用膜过滤方法进行过滤除菌。

即用型试剂不需灭菌，应参见相关国际标准或供应商使用说明，直接使用。

器具和设备消毒处理方法

湿热灭菌：采用高压灭菌器， 121 ℃灭菌20分钟，适用于玻璃器皿、移液器吸头

、塑料瓶等。按照GB 15981 的规定，评价高压灭菌器的杀菌效果。

干热灭菌：采用干燥箱灭菌，160 ℃灭菌2h，180 ℃灭菌2h，适用于玻璃器皿，不

锈钢器具等。

LB营养琼脂操作方法和注意事项如下

加水

打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。装料、加盖灭菌材料放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。

排气

打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。

升压、保压和降压

当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止加热，待压力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。

灭菌后的培养基空白培养

灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养，经24h培养无菌生长，可保存备用；斜面培养基取出后，立即摆成斜面后空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后，空白培养。

干热灭菌法

通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至160～170℃维持1～2h。

干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品，液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。

灭菌前的准备

玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内；三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸，用棉绳以活结扎紧，以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心，轻轻捅入管口，松紧必须适中，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去，灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌，也可用纸条斜着从吸管尖端包起，逐步向上卷，头端的纸卷捏扁并拧几下，再将包好的吸管集中灭菌。

干燥箱灭菌

将包扎好的物品放入干燥烘箱内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至160～170℃并恒温1～2h，注意勿使温度过高，超过170℃，器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿，温度为120℃持续30分钟即可。温度降至60～70℃时方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。

用此法灭菌时，绝不能用油、蜡纸包扎物品。

火焰灭菌

直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底。对于接种环，接种针或其它金属用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的。

结果

记录各种不同物品所用的灭菌方法及灭菌条件（温度、压力等）。

试述高压蒸汽灭菌的过程及注意事项。

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